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引加生物的T4 DNA聚合酶對5′→3′方向的DNA合成起到催化作用，需要使用模板和引物。該酶具有3′→5′核酸外切酶活性，比DNA聚合酶I（E. coli）中發現的活性高得多。與DNA聚合酶I（E. coli）不同，T4 DNA聚合酶不具有5′→3′核酸外切酶功能。

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